Как водяная баня для расправления гистологических срезов снимает мелкие складки
У половины парафиновой ленты, которую сразу клали на водяную баню, после окраски гематоксилин-эозином под световым микроскопом остались мелкие складки и морщины. У второй половины, после 3-5 минут на спирте 1:15 и той же бани, складок не увидели. Водяная баня для расправления гистологических срезов в опыте Kumar (2012) была нагрета до 34-38 °C. Процентов и статистического критерия в этом осмотре нет.
Мелкие складки после одной водяной бани
В рутинном приёме парафиновую ленту расправляют на тёплой воде. Kumar приводит диапазон примерно 34-38 °C со ссылкой на Preece, 1959. Это не отдельный замер Kumar, а окно, на которое статья опирается для обычной бани. Тёплая вода помогает расправить срез и убрать складки. Многие мелкие складки и пузырьки воздуха при этом остаются, пока срез лежит на поверхности воды.
Опыт смотрит именно эти оставшиеся складки. Первую половину ленты клали сразу на баню, складки снимали тупым пинцетом насколько получалось, и только потом брали срез на стекло. После окраски мелкие складки и морщины на этой половине всё равно были видны.
Условия опыта: пятьдесят срезов и две половины ленты
Kumar (2012), DOI 10.4067/s0717-95022012000100007, взял 50 срезов из 25 типов тканей. Это гистологические срезы тканей разного происхождения. В дизайне их отнесли к четырём группам: A - ткани с кровью, например селезёнка (n=5); B - рыхлые, например мозг и лимфоузел (n=5); C - плотные, например щитовидная железа и матка (n=8); D - прочие, например мочеточник, аппендикс и маточная труба (n=7). Сумма n - 25 типов тканей. Буква n относится к типам тканей, не к числу срезов. Толщина ленты 5 мкм. Блоки резали на микротоме Minot, в статье написано Minot Rotory.
Здесь лента уже нарезана. Как получают ленту на ротационном микротоме, разобрано отдельно: приготовление гистологического среза. Парафиновый блок до ножа - предыдущий этап: заливка ткани в парафин.
Спирт 1:15 готовили как 1 объём абсолютного этанола на 15 объёмов воды. Раствор делали свежим, когда он был нужен. Ленту делили на две половины и вели их по-разному.
Первую половину сразу переносили на водяную баню, нагретую до 34-38 °C. Складки снимали тупым пинцетом, лёгким нажатием, и старались убрать их по максимуму. Только после этого срез брали на стекло с адгезивом.
Вторую половину 3-5 минут держали на этом разбавленном спирте и лишь потом переносили на ту же баню. Интервал 3-5 минут относится к спирту, не ко времени, которое срез потом проведёт на воде.
Что показал осмотр двух половин ленты
Обе половины взяты из одной ленты. Толщина 5 мкм, кусок ткани и баня 34-38 °C у них общие. Добавлен только шаг на спирте. Смотрели уже смонтированный срез гистологического препарата, не мокрую ленту на воде: стекло с адгезивом, окраска, световой микроскоп.
| Половина ленты | Что сделали до стекла | Что увидели под микроскопом |
|---|---|---|
| Первая | Сразу на баню 34-38 °C, складки снимали пинцетом | Мелкие складки и морщины остались |
| Вторая | 3-5 мин на спирте 1:15, затем та же баня 34-38 °C | Складок и морщин не увидели |
Так выглядели все изученные ткани. Рисунки 1-3 - примеры групп A, B и D. Группы C на рисунках нет. Доли, проценты и статистический критерий автор не приводит, в том числе по группам. Из рисунков нельзя вычитать «стало лучше на N процентов»: такой цифры нет.
Фраза про отсутствие складок относится только ко второй половине. К срезу, который шёл на одну баню, её переносить нельзя.
Четыре группы в дизайн входят, но результат по ним не разложен. Автор даёт общую картину, без сравнения «для одной группы лучше, для другой хуже».
Опыт не сравнивает разные температуры бани. Обе половины попали на одну и ту же воду 34-38 °C. Таблица не отвечает, что будет при 40-44 °C или при другой сушке. Эти окна лежат в других текстах.
Время на воде, другие окна температуры и границы
Время на воде Kumar не мерил. Он приводит Bancroft и Gamble (2002): около 30 секунд достаточно, чтобы срез расправился. Дольше срез может чрезмерно растянуться, и ткань исказится. Это цитата учебника, не хронометраж опыта и не 3-5 минут спирта.
Обзор Al-Sabawy (2021), DOI 10.33899/ijvs.2021.131918.2023, даёт другое окно: горячая баня 40-44 °C, чтобы раскрыть трещины и уменьшить складки, затем сушка стекла на плитке при 60 °C один час. Отдельно нагрев слайдера до 60 °C не меньше 15 минут. Ссылка 56 ведёт на Kumar, но в его тексте нет ни 60 °C, ни 15 минут. На баню 34-38 °C их не переносят.
Микротомный термокомплекс HWBT-75 не микротом: баня и термостолик для промывания и высушивания срезов после микротома. На карточке печь, водяная баня, нагреватель, дисплейная панель и цифровое управление. Диапазон от комнатной температуры до 90 °C. Баня «порядка 45 °C», печь «порядка 70°» без знака °C, нагреватель «порядка 70 °C». Слово «порядка» на карточке не научная норма и с окнами статей не совпадает.
Приём Culling (1974) не та же баня: альбуминизированное стекло греют на металлической площадке газом или электричеством, наливают дистиллированную воду и кладут срез. Kumar пишет, что такой нагрев часто плохо действует на срез. После сушки идёт окраска: гистологические окраски.
Как выбрать водяную баню и термостолик для расправления срезов?
Уставку берут из протокола лаборатории. Окна статей и «порядка» с карточки не усредняют.
- 2. Время среза на воде: Около 30 секунд по Bancroft внутри статьи Kumar. Дольше срез может чрезмерно растянуться. Это не 3-5 минут спирта и не замер опыта.
- Сушка стекла после бани: Обзор: плитка 60 °C один час или слайдер 60 °C не меньше 15 минут. Печь карточки «порядка 70°», нагреватель «порядка 70 °C».
- Баня и термостолик в одном устройстве: Микротомный термокомплекс HWBT-75 совмещает водяную баню и термостолик: печь, баня, нагреватель и дисплей.
- Управление температурой и рабочее место: Цифровое управление, питание 220 В ±10% при 50 Гц или 110 В ±10% при 60 Гц, 600 Вт, 550×340×140 мм, 9 кг.
- Граница задачи: Имя «микротомный термокомплекс» не делает прибор микротомом. Ленту режет микротом, здесь промывка и сушка уже нарезанного среза.
Если вам необходимо расправить ленту срезов и высушить стекло до окраски
Для промывания и высушивания гистологических срезов после микротома смотрите микротомный термокомплекс HWBT-75: в одном устройстве водяная баня и термостолик.
Если нужна другая конфигурация или задача в резке блока, а не в расправлении ленты, напишите нам. Александра, технический специалист по подбору лабораторного оборудования, поможет подобрать модель под вашу методику.
- Тел.: 8 (499) 490-02-72
- Email: blog@assa-group.ru
Итог
В опыте Kumar одна баня при 34-38 °C оставила мелкие складки, а спирт 1:15 на 3-5 минут и затем та же баня дали срез без складок при осмотре всех изученных тканей. Время на воде держат коротким по указанию Bancroft. Температуру бани и сушки берут из своего протокола и не смешивают окна 34-38 °C, 40-44 °C и сушку 60 °C. Для бани и сушки стекла в этой цепочке берут микротомный термокомплекс HWBT-75, он ленту не режет.
Источники:
- Kumar (2012). Role of dilute alcohol in the removal of fine wrinkles from paraffin sections, a histo-technical study. DOI 10.4067/s0717-95022012000100007
- Al-Sabawy (2021). Standard techniques for formalin-fixed paraffin-embedded tissue: A Pathologist's perspective. DOI 10.33899/ijvs.2021.131918.2023
