Как выбрать иммуностейнер для лаборатории
Рабочие протоколы для концентрата антитела 22C3 к PD-L1 получили на Dako ASL48 и VENTANA BenchMark ULTRA. На Leica Bond-III заметное окрашивание контрольной ткани появилось только при высоких концентрациях 22C3, поэтому 120 образцов немелкоклеточного рака лёгкого на этой платформе не проверяли. После раздельной оптимизации дихотомизированная доля позитивных опухолевых клеток на Dako ASL48 и VENTANA BenchMark ULTRA почти полностью совпала с набором PD-L1 IHC 22C3 pharmDx на Dako ASL48: в источнике это почти 100% совпадение TPS, не точные 100% и не один скопированный режим. Результат относится к платформам Dako, VENTANA и Leica. К иммуностейнеру IHC-480 он не относится.
Почему протокол ИГХ не переносится между платформами
Ilie и соавторы проверяли, можно ли получить рабочий протокол концентрата 22C3 на разных платформах иммуногистохимии и совпадёт ли дихотомизированный TPS с готовым набором S2. В сравнение вошли три платформы, в статье они названы как автоматический стейнер: Dako ASL48, VENTANA BenchMark ULTRA и Leica Bond-III. Набор PD-L1 IHC 22C3 pharmDx был ориентиром на Dako ASL48, а не единственным режимом для остальных приборов.
Оптимизированные протоколы получили на Dako ASL48 и VENTANA BenchMark ULTRA. Уже подогнанные протоколы этих двух платформ сравнивали с набором pharmDx на Dako ASL48. Leica Bond-III в это сравнение не входил. Дихотомизированный TPS сводят к двум категориям по доле позитивных опухолевых клеток: почти полное совпадение категорий вышло после раздельной оптимизации, не копированием одной схемы окраски.
Режим концентрата 22C3 с Dako ASL48 или VENTANA BenchMark ULTRA на Leica Bond-III этой работой не подтверждён.
Что показывает контроль на уже проверенной платформе
Концентрат BP6165 на LYNX480 PLUS в 87 биоптатах аденокарциномы лёгкого показал чувствительность 98.30% и специфичность 100% относительно известного статуса ALK, в сравнении с D5F3 на системе VENTANA S1. К IHC-480 эти проценты не относятся.
Жидкий контроль и ткань на LYNX480 PLUS отходят от обычной окраски вместе, если сменить разведение BP6165. При 1:25 лимфоциты окрашены неспецифически, отрицательный клеточный контроль дал фон. При 1:1600 окраска слабее, при 1:6400 ещё слабее и у ткани, и у положительного контроля. Так на этой платформе видно сбой разведения.
Если демаскировку убрать или сократить до 20 минут, положительный жидкий контроль даёт отрицательное окрашивание или только слабое цитоплазматическое, как и тканевой контроль. По нему следят за полнотой демаскировки в протоколе LYNX480 PLUS.
На модуле контроля качества LYNX480 PLUS автоматическое нанесение дало более ровную круглую каплю и более ровное распределение клеток, чем ручное. Авторы предполагают одинаковую силу и скорость зонда. Это предположение о форме капли, не оценка точности диагноза и не описание другого прибора.
Что из карточки IHC-480 заложить в ТЗ
В техническое задание кладут пункты карточки. Параметры иммуностейнера автоматического сверяют с IHC-480, а не с режимом Dako, VENTANA или Leica.
В карточке есть ещё три условия. Прибор воспроизводит протокол ручной окраски. Очистные отверстия чистят внутреннюю и внешнюю стенки слива и предусмотрены против перекрестного загрязнения. Рама для образцов идёт с установочным комплектом, срезы должны быть расправлены и стабилизированы.
| Что проверить | Факт для ТЗ | Чего не приписывать IHC-480 |
|---|---|---|
| Дозировка реагентов | до 50 мкл, индивидуальное программирование расхода антител | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Полка реагентов | 64 типа реагентов; по завершении процесса бутылочки снимают, антитела помещают в холодильник | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Срезы за один раз | от 1 до 3, размещение срезов в нижней области | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Открытая система | антитела любого производителя; первичные антитела, системы детекции и буферные растворы любых производителей | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Типы образцов | парафиновые срезы, замороженные ткани, пункционные биоптаты, цитологические мазки, срезы костного мозга | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Герметизация | система герметизации исключает высыхание срезов | факт карточки, не результат S1 или S2 |
| Перенос протокола | протокол ИГХ с другой автоматической платформы не переносится без повторной проверки | ограничение S2 (Dako ASL48, VENTANA BenchMark ULTRA, Leica Bond-III), не характеристика этого прибора |
| Чувствительность и специфичность | 98.30% и 100% только для концентрата BP6165 на LYNX480 PLUS, 87 биоптатов аденокарциномы лёгкого | не переносить на этот прибор и не читать как свойство любой платформы |
Границы переноса протокола и цифр
Протокол ИГХ с другой автоматической платформы не переносится без новой проверки. Это вывод S2, не пункт карточки.
Часть авторов работы о LYNX480 PLUS (JL, CL, HQ, RG, JX) состоит в штате Hangzhou Bailing Biotechnology. Компания выпускает реагенты для иммуногистохимии и автоматический анализатор под маркой Biolynx. Показатели этой статьи нельзя читать как стороннюю проверку другого иммуностейнера.
Равномерность капли контроля показана на модуле LYNX480 PLUS. На IHC-480 её не переносят.
Как выбрать иммуностейнер для ваших задач?
В список требований идёт карточка. Режим окраски с другой платформы туда не копируют.
- 2. Дозировка до 50 мкл: расход антител программируют индивидуально, в ТЗ фиксируют предел карточки до 50 мкл, а не объём из чужого протокола.
- Типы образцов: в ТЗ отмечают нужные виды из карточки: парафиновые срезы, замороженные ткани, пункционные биоптаты, цитологические мазки, срезы костного мозга.
- Число срезов за один проход: в цикле ТЗ пишут от 1 до 3 срезов в нижней области, как в карточке.
- Полка на 64 реагента: после процесса бутылочки снимают, антитела убирают в холодильник, этот шаг вносят в регламент.
- Герметизация срезов: в карточке система герметизации исключает высыхание, и этот пункт проверяют при выборе.
- Повторная проверка протокола при смене платформы: протокол с Dako ASL48, VENTANA BenchMark ULTRA или Leica Bond-III на другую платформу проверяют заново, почти полное совпадение TPS его не заменяет.
Если вам необходимо подобрать иммуностейнер под задачу лаборатории
Рассмотрите иммуностейнер IHC-480 как отправную точку для технического задания: открытая система, доза реагента и типы образцов берутся из карточки прибора.
Если нужна другая конфигурация, напишите нам. Александра, технический специалист по подбору лабораторного оборудования, поможет подобрать модель под задачу лаборатории.
- Тел.: 8 (499) 490-02-72
- Email: blog@assa-group.ru
Итог
Почти полное совпадение дихотомизированного TPS для концентрата 22C3 получили после раздельной оптимизации протоколов на Dako ASL48 и VENTANA BenchMark ULTRA, а 120 образцов немелкоклеточного рака лёгкого на Leica Bond-III не проверяли. В техническое задание по иммуностейнеру IHC-480 входят пункты его карточки. Чувствительность 98.30% и специфичность 100% остаются результатом концентрата BP6165 на LYNX480 PLUS.
Источники:
- Ilie и соавторы (2017). Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0183023
- JL, CL, HQ, RG, JX и соавторы. A novel automated IHC staining system for quality control application in ALK immunohistochemistry testing. https://doi.org/10.3389/pore.2025.1611964
